國(guó)内細胞治療以藥品形式申報的勢頭正在快速增長(cháng)，以藥品的監管模式來管理(lǐ)細胞治療在國(guó)内也越來越清晰。而生物(wù)類似藥熱度也一直居高不下，我國(guó)抗體(tǐ)藥物(wù)的發展速度也已今非昔比。
在此背景下，艾力特生命科(kē)學(xué)與生物(wù)制品圈和抗體(tǐ)圈再一次聯手，于2019年6月21日(周五)在廣州舉辦(bàn)了主題為(wèi)免疫治療藥物(wù)研發進展交流會，本次會議以免疫治療藥物(wù)的研發進展為(wèi)主題，8位演講嘉賓和100多(duō)位來自各代表企業的聽衆齊聚一堂，一起分(fēn)析和探讨免疫治療藥物(wù)研發進展中(zhōng)的機遇和挑戰。
此次論壇的演講内容包括：CAR-T細胞“制導”精(jīng)準殺癌——一種可(kě)調控的嵌合抗原受體(tǐ)T細胞（CAR-T）及其在實體(tǐ)瘤免疫治療中(zhōng)的應用(yòng)、納米抗體(tǐ)技(jì )術平台的應用(yòng)、計算模拟在抗體(tǐ)研發中(zhōng)的應用(yòng)、行業巨變下單抗藥物(wù)研發企業的創新(xīn)之路、早期治療性抗體(tǐ)候選物(wù)可(kě)開發性評估、H2L2平台在全人源抗體(tǐ)中(zhōng)的應用(yòng)、基于細胞治療行業的GMP質(zhì)量體(tǐ)系和驗證管理(lǐ)等，内容豐富多(duō)彩，精(jīng)彩紛呈，是一次難得的學(xué)習之旅和分(fēn)享盛宴！
這次會議的成功舉辦(bàn)離不開業内朋友們的支持和信任，在此，艾力特再次對大家的關注表示感謝(xiè)，希望在生命科(kē)學(xué)的賽道上我們繼續并肩前行！
艾力特作(zuò)為(wèi)為(wèi)生命科(kē)學(xué)和生物(wù)技(jì )術行業提供先進的儀器設備、技(jì )術以及服務(wù)，感恩所有(yǒu)的生物(wù)制藥行業客戶，是您們的信任和支持，讓艾力特生命科(kē)學(xué)發展為(wèi)集研發生産(chǎn)，進口設備代理(lǐ)為(wèi)一體(tǐ)的高科(kē)技(jì )公(gōng)司。感謝(xiè)您們的一路相伴，艾力特人将一如既往的為(wèi)生物(wù)制藥産(chǎn)業提供先進的工(gōng)藝設備和技(jì )術解決方案及服務(wù)。
9年前，艾力特售出中(zhōng)國(guó)第一台ATF灌流設備。今天，5個基于ATF技(jì )術的産(chǎn)品進入臨床III期并即将商(shāng)業化。全國(guó)超過30家公(gōng)司正在基于ATF開發灌流和濃縮批次工(gōng)藝，藥明生物(wù)成為(wèi)全球最大的ATF灌流技(jì )術平台之一，中(zhōng)國(guó)最大的基于3000L生物(wù)反應器的灌流生産(chǎn)線(xiàn)即将建成。
今天，中(zhōng)國(guó)免疫治療行業進入商(shāng)業化進程的新(xīn)篇章！超過100家生物(wù)制藥客戶正在使用(yòng)艾力特提供的工(gōng)藝過程監控和檢查設備，超過20家抗體(tǐ)生物(wù)制藥企業正使用(yòng)艾力特提供的符合FDA，EU-GMP要求的蒸汽滅菌，VHP空間滅菌等相關設備和服務(wù)，超過100家免疫治療的客戶正使用(yòng)我們研發生産(chǎn)的CounrtStar細胞分(fēn)析儀。
在中(zhōng)國(guó)免疫治療藥物(wù)産(chǎn)業化發展的道路上，艾力特将一如既往，砥砺前行，把最好的服務(wù)最好的産(chǎn)品帶給免疫治療行業。
随着新(xīn)版GMP的實施和推廣，我國(guó)對無菌藥品的生産(chǎn)提出了更高的要求。尤其是随着生物(wù)制藥的快速發展，Single Use 技(jì )術越來越被廣泛應用(yòng)，廠房布局也越來越靈活，空間滅菌一直以來都是生物(wù)制藥生産(chǎn)過程中(zhōng)的關鍵環節，為(wèi)了提高産(chǎn)品的質(zhì)量，選擇合适的滅菌方式就顯得尤為(wèi)重要。在當前各種滅菌技(jì )術當中(zhōng)，幹法汽化過氧化氫(VHP)滅菌被公(gōng)認為(wèi)最理(lǐ)想的滅菌方式。VHP滅菌方式正迅速成為(wèi)生物(wù)制藥行業尤其是抗體(tǐ)、CAR-T、幹細胞等領域生物(wù)淨化的新(xīn)選擇，其可(kě)将無菌保證水平（SAL）降低至10-6水平以下。
Geschko 汽化過氧化氫發生器是德(dé)國(guó) PEA 獨立開發的可(kě)用(yòng)于潔淨室、傳遞窗和隔離器等密閉空間滅菌的設備，也可(kě)集成到空調系統進行滅菌。
該發生器采用(yòng)第三代幹法閃蒸技(jì )術，産(chǎn)生的過氧化氫氣體(tǐ)殺菌能(néng)力強，不容易在物(wù)體(tǐ)表面凝結，具(jù)有(yǒu)良好的材料兼容性；移動式主機可(kě)靈活部署，配置分(fēn)布降解系統可(kě)增加滅菌體(tǐ)積，加速滅菌循環；滅菌過程自動化監控，潔淨設計、數據完整性等符合GMP法規要求。
細胞治療，将改變人類疾病的治療範式，由過去重複的症狀控制轉為(wèi)一次性的治愈，是引領生物(wù)醫(yī)學(xué)的希望。其中(zhōng)，嵌合抗原受體(tǐ)（CAR）T細胞療法是近年來發展非常迅速的一種細胞治療技(jì )術。而濃度、活率對于CAR-T整個生産(chǎn)過程非常重要，艾力特自主研發生産(chǎn)的Countstar Rigel熒光細胞分(fēn)析儀在智能(néng)、精(jīng)準、合規方面滿足您對細胞計數儀所有(yǒu)的想象和需求。
01
不同行業中(zhōng)台盼藍計數的痛點
1) 細胞治療領域
台盼藍計數：PBMC分(fēn)離後，需要進行分(fēn)離效果的測試，指标有(yǒu)濃度，活率，這些指标用(yòng)于指導下一步的實驗操作(zuò)。但目前梯度離心分(fēn)離過程中(zhōng)，會有(yǒu)紅細胞的殘留，而紅細胞的大小(xiǎo)與PBMC接近，且台盼藍拒染，也就是傳統的台盼藍方法不能(néng)分(fēn)辨紅細胞與活的PBMC，造成濃度與活率的差異（見Figure1中(zhōng)的圖片）
Figure1
2) 發酵生産(chǎn)（抗體(tǐ)藥）領域
CHO細胞在發酵後期，會有(yǒu)很(hěn)多(duō)細胞碎片和雜質(zhì)産(chǎn)生，台盼藍染色無法進行準确的活率，濃度計數（見Figure2中(zhōng)的圖片）。濃度，活率指标對于發酵終點的确定是重要的參考依據。
Figure2
3）幹細胞領域
原代間充質(zhì)幹細胞在分(fēn)離的時候，會有(yǒu)大量的雜質(zhì)産(chǎn)生，造成對目标細胞分(fēn)析的幹擾（見Figure3中(zhōng)的圖片）。但原代細胞分(fēn)離效果的确定對于後面實驗至關重要，有(yǒu)些分(fēn)離效果很(hěn)差或者未分(fēn)離到間充質(zhì)幹細胞的樣本，需要做不同的處理(lǐ)策略。
Figure3
02
AO/PI計數解決台盼藍計數的痛點
1）AO/PI雙熒光方法對PBMC細胞計數
Countstar優化了的雙熒光染色方法，可(kě)以簡單，準确地測定PBMC濃度和活力。用(yòng)AO/ PI染色的樣品可(kě)用(yòng)Counstar Rigel分(fēn)析，CountstarRigel使用(yòng)預先優化設置對PBMC進行濃度活率分(fēn)析。AO/PI方法可(kě)以精(jīng)準區(qū)分(fēn)死細胞和活細胞，并且能(néng)排除無核細胞的幹擾。
Figure4 Countstar Rigel對PBMC進行細胞活率計數分(fēn)析
2）分(fēn)析新(xīn)鮮臨床樣品中(zhōng)的TNC活率
由于新(xīn)鮮的臨床樣品含有(yǒu)非常高百分(fēn)比的血小(xiǎo)闆和紅血細胞，在明場下TNC很(hěn)難被區(qū)分(fēn)出來。在一些實驗室中(zhōng)，樣品被裂解用(yòng)于TNC分(fēn)析，但不能(néng)确定細胞活力。AO/ PI雙熒光方法在無需裂解紅細胞的情況下可(kě)輕松測量新(xīn)鮮臨床樣品如骨髓，臍帶血和外周血中(zhōng)的TNC濃度和活力。
Figure5Countstar Rigel對未裂紅的樣機進行計數
3）運輸前後的ASCs細胞AO/PI及台盼藍計數活率對比結果
結論：運輸前細胞狀态好，台盼藍與AO/PI計數結果無明顯差異；運輸後的細胞樣本，台盼藍計數結果與運輸前無明顯差異，但是AOPI計數結果明顯低于台盼藍計數。
不管是培養過程中(zhōng)還是運輸前的狀态比較好的細胞樣本，台盼藍計數與AO/PI熒光計數結果細胞活率保持一緻；但對于凍存複蘇及運輸後複蘇的樣本，AO/PI活率明顯比台盼藍計數結果低。類似的實驗結果在很(hěn)多(duō)地方得到驗證，活率計算結果差異大小(xiǎo)依據凍存效果不同有(yǒu)所波動。所以選擇countstar Rigel AO/PI熒光方法計數能(néng)更精(jīng)确的區(qū)分(fēn)凍存複蘇細胞死活，從而反映更加真實的細胞活力狀态。
2018年9月，美國(guó)藥典（USP-NF）出台了關于細胞冷凍保存的政策，文(wén)中(zhōng)明确提出，對于凍存複蘇的樣本，類似于台盼藍的染料來檢測細胞完整性的方法用(yòng)的越來越少，因為(wèi)其不能(néng)很(hěn)好的辨别凍存和複蘇的細胞，這種檢測方法經常需要特定細胞種類并且指定合适的濃度和時間。當下熒光染料越來越多(duō)的應用(yòng)于複蘇細胞的濃度活率檢測。USP-NF建議至少選用(yòng)兩種方法對複蘇後的細胞進行活率檢測。詳情請參考《USPGeneral Chapter <1044> Cryopreservation of Cells》
目前台盼藍計數還是市場上主流的細胞計數方法。 但在細胞治療行業，需要測量原代細胞已經凍存複蘇的細胞，台盼藍的技(jì )術原理(lǐ)已經不能(néng)滿足其需求，雙熒光AO/PI計數的方法變得越來越普及。
（PS: 僅限于研究用(yòng)途， 不可(kě)用(yòng)于診斷操作(zuò)）
