在生物(wù)學(xué)實驗中(zhōng)，細胞計數是必不可(kě)少的一個重要環節。而血球計數闆則是一種常用(yòng)的細胞計數工(gōng)具(jù)。
血球計數闆的構造
血球計數闆由優質(zhì)厚玻璃制成，有(yǒu)4個凹槽口，中(zhōng)間部分(fēn)被“H”型凹槽分(fēn)為(wèi)上下兩個相同的計數平台。
血球計數闆又(yòu)分(fēn)為(wèi)湯麥式和希利格式。
湯麥式：大方格内分(fēn)為(wèi)25中(zhōng)方格，每一中(zhōng)方格又(yòu)分(fēn)為(wèi)16小(xiǎo)格即25×16型。
希利格式：大方格内分(fēn)為(wèi)16中(zhōng)方格，每一中(zhōng)方格又(yòu)分(fēn)為(wèi)25小(xiǎo)格即16×25 型。
血球計數闆計數原理(lǐ)
血球計數闆整個網格區(qū)域分(fēn)為(wèi)9個大方格，其中(zhōng)四角及中(zhōng)間大方格為(wèi)我們的計數區(qū)域，我們根據大方格中(zhōng)小(xiǎo)方格數将血球計數闆計數區(qū)分(fēn)成兩種：黃色區(qū)域和藍色區(qū)域，兩個區(qū)域計數體(tǐ)積相等。藍色和黃色計數區(qū)，長(cháng)寬都是1mm，蓋玻片覆蓋在計數池上方形成0.1mm 深度的空間，計數體(tǐ)積為(wèi)1mm*1mm*0.1mm=1/104ml
細胞濃度=cell/ml=測量區(qū)域細胞個數/測量區(qū)域體(tǐ)積×稀釋倍數=測量區(qū)域細胞個數×104×稀釋倍數。
血球計數原則
01根據細胞密度判斷
1）如果密度比較小(xiǎo)，可(kě)以計數藍色區(qū)域大方格；
2）如果細胞密度适中(zhōng)，可(kě)以計數藍色區(qū)域16個大方格中(zhōng)的一個；
3）如果細胞密度非常小(xiǎo)，則計數黃色區(qū)域25方格中(zhōng)的較小(xiǎo)方格；
但是無論選擇哪種方式計數，每個方格中(zhōng)至少有(yǒu)20-50個細胞來計數，密度過低，誤差較大；而細胞密度過高，往往會更容易造成操作(zuò)者疲勞，增加出錯概率。故建議每個方格中(zhōng)最多(duō)計數100個左右細胞為(wèi)宜。
02根據細胞大小(xiǎo)進行判斷
1）10μm以上的細胞選擇藍色區(qū)域；
2）10μm以下的細胞選擇黃色區(qū)域計數。
這主要跟計數區(qū)域面積及顯微鏡放大倍數有(yǒu)關。10μm以下的細胞需要切換高倍物(wù)鏡才能(néng)看清細胞形态，而高倍物(wù)鏡下面無法顯示大方格完整區(qū)域，故選用(yòng)25格計數區(qū)域中(zhōng)較小(xiǎo)方格更好。
血球計數闆的優缺點
優點
1）在顯微鏡下直接進行測定，操作(zuò)方便快捷，且儀器損耗較小(xiǎo)。
2）“眼見為(wèi)實”，讓科(kē)研人員較為(wèi)準确了解自己的細胞狀态。
3）成本低，沒有(yǒu)耗材成本。
缺點
1）受人為(wèi)因素較多(duō)，取樣面積較小(xiǎo)，可(kě)能(néng)發生的随機誤差較大。精(jīng)準度一般，重複性較低。
2）一次細胞計數時間較長(cháng)。“傷眼睛”，不适合多(duō)樣本、連續計數。
3）針對複雜樣本，會容易将雜質(zhì)計算在内。
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