對GMP車(chē)間潔淨區(qū)定期進行滅菌是保證生産(chǎn)産(chǎn)品質(zhì)量的一個重要環節。目前在我國(guó)對空間進行滅菌的常用(yòng)方法是比較傳統的甲醛熏蒸法。甲醛的殺菌能(néng)力不容置疑，但是随着科(kē)學(xué)技(jì )術的發展以及人們環保意識的增強，其越來越受到專家的質(zhì)疑，因為(wèi)甲醛是一種三緻危害物(wù)。為(wèi)了解決甲醛滅菌時間過長(cháng)以及毒性和殘留問題（會産(chǎn)生結晶狀殘留物(wù)），國(guó)内有(yǒu)不少企業開始采用(yòng)汽化過氧化氫滅菌技(jì )術。過氧化氫是一種廣譜殺菌劑，汽化過氧化氫滅菌技(jì )術由于滅菌時間短、無毒、無殘留，且滅菌效果容易驗證，廣泛被歐盟國(guó)家認可(kě)。我國(guó)的GMP認證要與歐盟接軌，潔淨區(qū)采用(yòng)過氧化氫滅菌技(jì )術必然為(wèi)大勢所趨。
目前汽化過氧化氫滅菌已成為(wèi)各國(guó)藥典、藥品生産(chǎn)質(zhì)量管理(lǐ)規範(GMP)、消毒滅菌技(jì )術規範所推薦的方法，滅菌工(gōng)藝已經非常成熟，重複性好，有(yǒu)專門的化學(xué)指示劑和生物(wù)指示劑驗證過氧化氫氣體(tǐ)分(fēn)布均勻情況和無菌保證水平。可(kě)廣泛應用(yòng)于生物(wù)制藥、醫(yī)療衛生、生物(wù)實驗室和動物(wù)研究實驗室等諸多(duō)領域。
一、試劑與儀器：
（1）生物(wù)指示劑（BiologicalIndicator，BI）：106CFU/片的嗜熱脂肪芽孢杆菌，ATCC12980；
（2）化學(xué)指示劑（ChemicalIndicator，CI）；
（3）濃度為(wèi)35%的食品級過氧化氫溶液；
（4）胰蛋白胨大豆肉湯培養基（TSB）；
（5）PEA MLT-17zeta汽化過氧化氫發生器；
（6）PEA LiRo氣體(tǐ)分(fēn)布系統；
（7）滅菌車(chē)間：某疫苗生産(chǎn)單位GMP潔淨車(chē)間，潔淨區(qū)層高2.8m、面積100㎡，空間總體(tǐ)積約280m³。
圖1、某疫苗生産(chǎn)單位GMP潔淨車(chē)間
二、滅菌過程：
整個滅菌過程分(fēn)為(wèi)以下幾個階段：
（1）将PEA MLT-17 zeta發生器和LiRo氣體(tǐ)分(fēn)布系統推入潔淨區(qū)前，先将設備表面用(yòng)75％酒精(jīng)擦拭清除幹淨，根據滅菌空間體(tǐ)積大小(xiǎo)，向儲液桶内添加足量的過氧化氫溶液；
（2）通過潔淨車(chē)間的空調系統對潔淨區(qū)的溫度和濕度進行調控，使二者達到設備可(kě)以滅菌運行的區(qū)間範圍；
（3）在潔淨車(chē)間内布置足量的生物(wù)指示劑和化學(xué)指示劑，并做好标記；
（4）在設備端設置滅菌程序，一個完整的滅菌循環主要包含以下4個部分(fēn)：調試階段（Waiting，Conditioning，Heating），主要是為(wèi)人員撤離以及設備預熱階段；快速注入階段（Vapourizing1），在此階段過氧化氫氣體(tǐ)以一個較快的速率注入待滅菌空間，環境中(zhōng)過氧化氫氣體(tǐ)濃度迅速升高；慢速注入階段（Vapourizing2），在此階段過氧化氫氣體(tǐ)以一個較慢速率注入待滅菌空間，維持過氧化氫氣體(tǐ)濃度保持一定的時間；降解階段（Neutralisation，Afterrun，End），在此階段過氧化氫氣體(tǐ)迅速分(fēn)解産(chǎn)生水分(fēn)和氧氣，環境中(zhōng)過氧化氫氣體(tǐ)濃度迅速下降。
圖2、滅菌循環主要滅菌程序設置
（5）當溫、濕度達到指定範圍後，關閉空調系統，人員撤出滅菌潔淨車(chē)間，啓動滅菌循環，對車(chē)間進行門密封；
（6）滅菌循環結束，開啓空調通風系統通過潔淨空氣置換以排除房間内部殘留的過氧化氫，從而使房間内空氣中(zhōng)過氧化氫氣體(tǐ)濃度低于職業允許暴露水平1ppm；
（7）收取化學(xué)指示劑和生物(wù)指示劑，觀察統計化學(xué)指示劑的變色情況，無菌操作(zuò)取出生物(wù)指示劑将其接種到TSB培養基中(zhōng)，所有(yǒu)培養基均需在培養箱中(zhōng)55℃～60℃的條件下進行培養，觀察培養24h後和第7天的結果，同時做好陽性對照和空白對照；
（8）經過24 h的培養，若培養液變渾濁，則判定為(wèi)陽性；若培養液澄清，則為(wèi)陰性；繼續培養至第七天，如果培養液變渾濁，則判定為(wèi)滅菌不合格；如果培養液澄清，則判定為(wèi)滅菌合格。
三、滅菌結果：
汽化過氧化氫滅菌技(jì )術，可(kě)對空氣與物(wù)體(tǐ)表面進行生物(wù)除染，是一種非常有(yǒu)效的消毒滅菌方法。PEA的汽化過氧化氫滅菌技(jì )術整個過程采用(yòng)全自動化智能(néng)控制，可(kě)精(jīng)确控制過氧化氫氣體(tǐ)濃度，材料兼容性好，可(kě)減少對工(gōng)作(zuò)人員與環境的危害，其滅菌過程、工(gōng)藝具(jù)有(yǒu)重現性，綠色、環保、安(ān)全可(kě)靠。
圖3、PEA發生器和氣體(tǐ)分(fēn)布系統在車(chē)間内的擺放位置及BI和CI的布點位置
滅菌循環結束，所有(yǒu)的化學(xué)指示劑均變色明顯，表明過氧化氫氣體(tǐ)在空間内分(fēn)布均勻；所有(yǒu)的生物(wù)指示劑無論是在培養的第24h或者培養結束的第7天，培養基均未變渾濁，表明滅菌合格。
汽化過氧化氫滅菌技(jì )術是目前用(yòng)于可(kě)密閉空間（如GMP車(chē)間、醫(yī)院病房、實驗動物(wù)中(zhōng)心、小(xiǎo)型倉庫等）和各種人造設備（如隔離器、冷凍幹燥機、孵化箱、傳遞窗、生物(wù)安(ān)全櫃、壓力蒸汽滅菌器、過濾器和各類風管及管道等）的一種可(kě)靠的消毒滅菌方法，具(jù)有(yǒu)廣闊的發展前景，是取代甲醛和臭氧等傳統空間消毒滅菌的理(lǐ)想方法，也是今後空間消毒滅菌的發展趨勢。
