VHP空間滅菌技(jì )術在CAR-T細胞生産(chǎn)中(zhōng)的應用(yòng)

近年來，細胞治療産(chǎn)品，尤其是嵌合抗原受體(tǐ)T細胞（CAR-T）的研發與臨床應用(yòng)發展迅猛。在美國(guó)臨床試驗網站檢索全球CAR-T細胞治療臨床試驗登記數可(kě)以發現，中(zhōng)國(guó)所登記的項目數僅次于美國(guó)，居全球第二。迄今為(wèi)止，國(guó)内已有(yǒu)近二十家公(gōng)司拿(ná)到了CAR-T細胞療法的臨床批件^[1]。

在細胞治療領域方面的監管，我國(guó)借鑒發達國(guó)家的經驗，正在努力推動CAR-T細胞産(chǎn)品的全生命周期監管。2017年12月，《細胞治療産(chǎn)品研究與評價技(jì )術指導原則（試行）》發布^[2]，對細胞産(chǎn)品的制備工(gōng)藝提出了高要求，建立了細胞治療産(chǎn)品按藥品途徑申報的指導原則。應當注意的是，細胞制品如CAR-T細胞療法與一般藥品相比，仍需額外的監管，其中(zhōng)最重要的部分(fēn)是安(ān)全問題。2019年11月28日，國(guó)家藥品監督管理(lǐ)局食品藥品審核查驗中(zhōng)心官網重磅發布《GMP附錄-細胞治療産(chǎn)品》（征求意見稿）^[3]，這是國(guó)内首部針對細胞治療産(chǎn)品的GMP附錄，彌補了我國(guó)對細胞治療産(chǎn)品生産(chǎn)質(zhì)量控制法規層面和技(jì )術層面的空白。

CAR-T 産(chǎn)品生産(chǎn)主要分(fēn)為(wèi)三個生産(chǎn)過程：

• 質(zhì)粒生産(chǎn)：在CAR-T産(chǎn)品的生産(chǎn)過程中(zhōng)，如有(yǒu)質(zhì)粒中(zhōng)間品，應有(yǒu)獨立的質(zhì)粒生産(chǎn)區(qū)；

（1）至少包括細菌複蘇、細菌擴增、細菌破碎、質(zhì)粒純化和除菌過濾等工(gōng)藝流程；

（2）質(zhì)粒生産(chǎn)區(qū)内應至少包括發酵、純化和除菌分(fēn)裝(zhuāng)三個功能(néng)區(qū)，其中(zhōng)發酵和純化功能(néng)區(qū)至少為(wèi)控制區(qū)，除菌分(fēn)裝(zhuāng)功能(néng)區(qū)的潔淨度至少為(wèi)“C+A”；

（3）應注意消毒滅菌工(gōng)作(zuò)，以避免不同種質(zhì)粒或不同批次質(zhì)粒的交叉污染。

• 病毒載體(tǐ)生産(chǎn)：

（1）至少包括細胞擴增、質(zhì)粒轉染（如有(yǒu)）、病毒收獲、病毒純化和除菌過濾等工(gōng)藝流程；

（2）病毒載體(tǐ)生産(chǎn)區(qū)應至少分(fēn)為(wèi)細胞培養、病毒轉染、病毒純化和除菌過濾等功能(néng)區(qū)；

（3）病毒載體(tǐ)的生産(chǎn)區(qū)應符合藥品 GMP 要求，應注意消毒滅菌工(gōng)作(zuò)，以避免不同批次的交叉污染及外源性微生物(wù)污染。

• CAR-T 産(chǎn)品生産(chǎn)：

（1）至少包括細胞分(fēn)離、細胞分(fēn)選（如有(yǒu)）、T 細胞激活、病毒感染、細胞擴增、細胞收獲和細胞冷凍（如有(yǒu)）等工(gōng)藝流程；

（2）CAR-T産(chǎn)品生産(chǎn)區(qū)應至少分(fēn)為(wèi)體(tǐ)細胞分(fēn)離分(fēn)選、細胞擴增和細胞冷凍等功能(néng)區(qū)；

（3）CAR-T産(chǎn)品的生産(chǎn)區(qū)應符合藥品GMP要求，CAR-T産(chǎn)品的生産(chǎn)應符合無菌技(jì )術操作(zuò)規範。

細胞操作(zuò)區(qū)，是用(yòng)于進行CAR-T細胞産(chǎn)品的生産(chǎn)操作(zuò)的區(qū)域，包括T細胞分(fēn)離、基因修飾、細胞培養擴增、制劑分(fēn)裝(zhuāng)等。1個細胞操作(zuò)間，同一時間隻能(néng)生産(chǎn)1個批次的産(chǎn)品，細胞操作(zuò)時間約2~3 h，培養時間約10~15天。房間環境潔淨級别為(wèi)B級，應注意避免交叉污染。生物(wù)廢棄物(wù)收集到密閉的袋子或容器，經廢物(wù)通道轉移到C級區(qū)，使用(yòng)雙扉式濕熱滅菌櫃進行滅活處理(lǐ)。

質(zhì)粒、病毒載體(tǐ)和 CAR-T 産(chǎn)品的生産(chǎn)區(qū)應分(fēn)别設置為(wèi)獨立區(qū)域，病毒載體(tǐ)和 CAR-T 産(chǎn)品的生産(chǎn)不應共用(yòng)空調淨化系統。除了生産(chǎn)區(qū)域，還需包括質(zhì)控區(qū)和儲存區(qū)，質(zhì)控區(qū)包括支原體(tǐ)、内毒素、無菌、微生物(wù)限度、陽性對照、流式細胞儀和分(fēn)子生物(wù)學(xué)等相關檢測，儲存區(qū)包括病毒、菌種和細胞儲存。

根據國(guó)家出台的相關政策，CAR-T的臨床生産(chǎn)必須在一個“B+A”的環境中(zhōng)，相對于傳統藥品的管理(lǐ)，結合CAR-T細胞療法自身的一些特點，如何保證這類産(chǎn)品的安(ān)全、有(yǒu)效和質(zhì)量可(kě)控具(jù)有(yǒu)極大的挑戰性，也對空間滅菌提出了更嚴格的要求。

CAR-T細胞治療不同于傳統藥物(wù)，是一種基于整合了CAR基因的自體(tǐ)T細胞療法，生産(chǎn)過程需無菌操作(zuò)，屬于非最終滅菌的無菌産(chǎn)品，且不能(néng)無菌過濾。

選擇CAR-T細胞治療的病人一般都處于腫瘤的終末期，時間就是生命，必須在盡可(kě)能(néng)短的時間内完成從抽血到給藥的過程，同時對CAR-T的藥物(wù)安(ān)全和質(zhì)量要求較高。

CAR-T細胞治療屬于個性化治療産(chǎn)品，一個病人就是一個批次，生産(chǎn)規模不大，生産(chǎn)周期較短，滅菌需求靈活多(duō)變：對滅菌循環的周期和批次要求非常高，批次之間對環境進行消毒滅菌不僅要徹底，還必須在時間上比較迅速，這也就限制了一些傳統的消毒滅菌方式的應用(yòng)，比如甲醛滅菌停産(chǎn)周期較長(cháng)且有(yǒu)殘留和紫外消毒效果無法保證。

氣化過氧化氫滅菌技(jì )術已成為(wèi)各國(guó)藥典、GMP、消毒滅菌技(jì )術規範所推薦的方法，滅菌工(gōng)藝已經非常成熟，重複性好，有(yǒu)專門的化學(xué)指示劑和生物(wù)指示劑驗證過氧化氫氣體(tǐ)分(fēn)布均勻情況和無菌保證水平。而幹法移動式的VHP滅菌設備因其滅菌效果好，物(wù)料兼容性優，最近幾年在空間滅菌領域得到了很(hěn)大的應用(yòng)。

與傳統的甲醛熏蒸滅菌相比，幹法VHP空間滅菌循環周期短，一般隻需要4-6小(xiǎo)時即可(kě)完成，并且無有(yǒu)害消毒劑殘留，這一點可(kě)以滿足CAR-T細胞的生産(chǎn)工(gōng)藝特點，方便企業的生産(chǎn)時間管理(lǐ)；同時移動式的設備自帶腳輪，可(kě)以随意移動部署，可(kě)對多(duō)個區(qū)域靈活滅菌，更加符合CAR-T細胞生産(chǎn)車(chē)間體(tǐ)積小(xiǎo)但數量多(duō)，空調機組複雜的特點；與空調機組固定式的VHP滅菌相比，也更加安(ān)全，同時固定投資成本小(xiǎo)，運行能(néng)源消耗成本低，便于企業提高經濟效益。

德(dé)國(guó)PEA是一家專注于氣化過氧化氫滅菌的公(gōng)司，目前有(yǒu)兩款不同型号的幹法移動式氣化過氧化氫發生器，可(kě)分(fēn)别滿足不同大小(xiǎo)空間的滅菌需求：MLT zeta單台發生器最大滅菌體(tǐ)積可(kě)達600m³，适用(yòng)于GMP車(chē)間，生物(wù)安(ān)全實驗室等大體(tǐ)積空間的滅菌；MLT19ii單台發生器最大滅菌可(kě)達200立方，特别适用(yòng)于CAR-T細胞治療行業GMP車(chē)間的滅菌，體(tǐ)積小(xiǎo)，滅菌周期短，部署靈活，滅菌效果可(kě)靠。